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              創傷弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

              • 更新時間:  2023-06-30
              • 產品型號:  50T
              • 簡單描述
              • 創傷弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
              詳細介紹

              注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

              產品名稱

              創傷弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

              英文名稱

              Vibrio vulnificus

              貨號

              CP934875

              儲存條件:

              14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
              1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
              2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
              3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
              4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
              5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

              探針法:
              創傷弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
              使用方法:
              一、樣品DNA的制備
              用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
              二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
              1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
              2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
              3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
              4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
              5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
              6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
              7. NC管中不加任何陽性對照。
              8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
              探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

              應用案例:
              樣品 DNA 的制備
              1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
              稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
              2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
              3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
              4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
              6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
              7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
              8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
              9.在 PCR 管中加入下列成分。
              以下是公司正在熱銷的產品:

              NHEDC2  線粒體鈉/交換蛋白質2抗體半固體營養瓊脂

              NHE1/APNH1  鈉通道蛋白抗體GN 增菌液

              NGX6  鼻咽癌細胞相關基因6抗體SS 瓊脂

              NGN3/Neurogenin 3  神經元素3抗體SS 瓊脂平板

              NGN1/Neurogenin 1  神經元素1抗體克雙糖鐵瓊脂(KI)

              NGF-β  神經生長因子β抗體克雙糖鐵瓊脂(KI)斜面(限供汽運)

              NGFR/p75NTR  神經生長因子受體抗體培養基

              NGB/neuroglobin  腦紅蛋白/神經紅蛋白/神經球蛋白抗體尿素瓊脂基礎(pH7.2)

              NGALR/Slc22A17  可溶性載質轉運蛋白22A17抗體40%尿素溶液

              NGAL/Lipocalin 2  脂質運載蛋白抗體尿素瓊脂斜面(pH7.2)

              NG2/CSPG4  黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖4抗體尿素瓊脂斜面(pH7.2)

              NG2  硫酸軟骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相關蛋白抗體苯氨酸培養基

              NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373)  酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體苯氨酸培養基

              創傷弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒NFX1  核轉錄因子X盒結合蛋白1抗體苯氨酸培養基

              NF-M/Neurofilament M  中分子量神經絲蛋白抗體10%三化鐵豬細小病PCR檢測試盒白頭翁皂苷D

              豬細小病實時熒光PCR檢測試盒白鮮

              豬圓病PCR檢測試盒白楊素

              豬圓病1型和2型雙重實時熒光PCR檢測試盒白楊素-7-葡萄糖酸苷

              豬圓病1型實時熒光PCR檢測試盒白芷屬腦

              豬圓病2型實時熒光PCR檢測試盒百兩金素A

              豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病三重實時熒光RT-PCR檢測試盒百秋李醇

              豬流行性腹瀉病RT-PCR檢測試盒百蕊草素I

              豬流行性腹瀉病實時熒光RT-PCR檢測試盒半邊旗4F

              豬傳染性胃腸炎病實時熒光RT-PCR檢測試盒半邊旗5F
              熒光定量PCR檢測試劑盒


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